脚轮电泳为什么容易刮花?
发表时间:2022-6-12 23:12:45
脚轮电泳法。是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其脚轮电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。
脚轮电泳技术的基本原理和分类
在电场中，推动带电质点运动的力(f)等于质点所带净电荷量(q) 与电场强度(e) 的乘积。f=qe质点的前移同样要受到阻力(f) 的影响，对于一个球形质点，服从stoke定律，即: f' =6πrηv式中r为质点半径，η为介质粘度，v为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时: f=f' 即qe=6πrη v
可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，脚轮电泳体系中其它因素也影响质点的脚轮电泳迁移率。
脚轮电泳法可分为自由脚轮电泳(无支持体)及区带脚轮电泳(有支持体)两大类。前者包括tise-leas式微量脚轮电泳、显微脚轮电泳、等电聚焦脚轮电泳、等速脚轮电泳及密度梯度脚轮电泳。区带脚轮电泳则包括滤纸脚轮电泳(常压及高压) .薄层脚轮电泳(薄膜及薄板) .凝胶脚轮电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶)等。
自由脚轮电泳法的发展并不迅速，因为其脚轮电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带脚轮电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。本节仅对常用的几种区带脚轮电泳分别加以叙述。
影响脚轮电泳迁移率的因素
1.电场强度电场强度 是指单位长度(cm) 的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm. 测得的电位降为200v, 那么电场强度为200v/20cm= 10v/cm。当电压在500v以下，电场强度在2-10v/cm时为常压脚轮电泳。
(三)等电聚焦脚轮电泳技术
等电聚焦( ioeletrie focusing， ief) 是60年代中期问世的一一种 利用有ph梯度的介质分
离等电点不同的蛋白质的脚轮电泳技术。由于其分辨率可达0.01ph单位，因此特别适合于分离分子
量相近而等电点不同的蛋白质组分。
1.ief的基本原理在ief的脚轮电泳中，具有ph梯度的介质其分布是从阳极到阴极，ph值
逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区域蛋白质分子
带负电荷向阳极移动，直至某一-ph位点时失去电荷而停止移动，此处介质的ph恰好等于聚焦
蛋白质分子的等电点(pl)。同理，位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动，直到它
们的等电点上聚焦为止。可见在该方法中，等电点是蛋白质组分的特性量度，将等电点不同的
蛋白质混合物加入有ph梯度的凝胶介质中，在电场内经过- -定时间后，各组分将分别聚焦在
各自等电点相应的ph位置上，形成分离的蛋白质区带。
2.ph梯度的组成ph 梯度的组成方式有二种，-种是人工ph梯度，由于其不稳定，重
复性差，现已不再使用。另一种是天然ph梯度。天然ph梯度的建立是在水平板或脚轮电泳管正负
极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物，在正极端吸入酸液，如硫酸、磷酸或
醋酸等，在负极端引入碱液，如氢氧化钠、氨水等。脚轮电泳开始前两性电解质的混合物ph为一
均值，即各段介质中的ph相等，用pho表示。脚轮电泳开始后，混合物中ph最低的分子，带负电
荷最多，pi为其等电点，向正极移动速度最快，当移动到正极附近的酸液界面时，ph 突然下
降，甚至接近或稍低于pi,这- -分子不再向前移动而停留在此区域内。由于两性电解质具有一
定的缓冲能力，使其周围一-定的区域内介质的ph保持在它的等电点范围。ph稍高的第二种两
性电解质，其等电点为pl，也移向正极， 由于pl>pl,因此定位于第一-种两性电解质之后，